เครื่องฝังเนื้อเยื่อ

การวางแนวที่ไม่เหมาะสมจะนำไปสู่ลักษณะทางเนื้อเยื่อวิทยาที่จัดเรียงอย่างไม่เป็นระเบียบบนสไลด์ ตัวอย่างเช่น เมื่อปรับทิศทางผิวหนัง ชิ้นงานจะต้องอยู่ในตำแหน่งเพื่อให้ขอบของเยื่อบุผิว เนื้อเยื่อใต้ผิวหนัง และชั้นที่ลึกกว่าอยู่ในแนวเดียวกันที่ด้านล่าง เพื่อให้มองเห็นชั้นในสไลด์ที่เสร็จแล้ว เมื่อฝังตัวอย่างมากกว่าหนึ่งชิ้น ควรฝังเนื้อเยื่อทั้งหมดไว้ที่ด้านล่างของภาชนะอย่างแน่นหนา เพื่อให้ส่วนที่ตัดสามารถนำเสนอเนื้อเยื่อที่ส่งมาได้อย่างถูกต้อง

สิ่งประดิษฐ์เนื่องจากการปฐมนิเทศที่ไม่เหมาะสมมักพบในระหว่างขั้นตอนการฝัง ซึ่งอาจนำไปสู่ความเสียหายต่อไมโครโตม การฉีกขาดของส่วน ซึ่งทำให้การศึกษาเนื้อเยื่อด้วยกล้องจุลทรรศน์ทำได้ยาก ผลที่ได้คือจำเป็นต้องฝังใหม่ ทำให้ใช้เวลานาน (TAT)

ขี้ผึ้งพาราฟินถือเป็นหนึ่งในองค์ประกอบที่สำคัญที่สุดของการฝังเนื้อเยื่อ และคุณภาพของพาราฟินเป็นพื้นฐานในการผลิตก้อน สูตรขี้ผึ้งพาราฟินควรได้รับการพัฒนาโดยมีคุณภาพสม่ำเสมอและเชื่อถือได้เพื่อลดการบิดเบี้ยวของเนื้อเยื่อ และให้ความต้านทานแรงอัดและความต่อเนื่องของริบบิ้นเป็นเลิศ พาราฟินที่แตกต่างกันมีอุณหภูมิจุดกำหนด สารเติมแต่ง และคุณลักษณะที่หลากหลาย มีพาราฟินที่ตอบสนองความต้องการในการประมวลผล การฝัง และการแบ่งส่วนของคุณ ดังนั้น ให้พิจารณาความต้องการของคุณอย่างรอบคอบและทำการวิจัย

เช่น แนะนำให้ใช้ Paraplast Regular สำหรับการฝังเนื้อเยื่อทั่วไป ประกอบด้วยส่วนผสมกลั่นของพาราฟินบริสุทธิ์สูงที่มีพลาสติกโพลีเมอร์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลควบคุม ซึ่งสนับสนุนการแทรกซึมของเนื้อเยื่อที่ดีขึ้นและส่วนคุณภาพที่เหนือกว่าด้วยการบีบอัดที่น้อยที่สุด

ฮิสโตเทคอาจพบกับสิ่งเจือปน ไม่ควรมีสิ่งเจือปนเช่น floccus สีขาว การมีอยู่ของตกตะกอนสีขาวบ่งชี้ว่ามีสารช่วยชำระล้างที่มากเกินไปในพาราฟิน เพื่อหลีกเลี่ยงปัญหานี้ ให้เพิ่มความถี่ในการเปลี่ยนพาราฟิน นอกจาก; ขอแนะนำให้ใช้วัสดุโครงสร้างคล้ายสลักเกลียวเพื่อทำให้เนื้อเยื่อเรียบที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้และแบ่งส่วนด้วยใบมีดเท่าๆ กันในขณะที่ทำการผ่าตัดด้วยไมโครโทมี

แม้ว่าจะไม่เป็นปัญหาทั่วไป แต่ความรู้เกี่ยวกับความพร้อมของแม่พิมพ์ขนาดต่างๆ โดยนักพยาธิวิทยาหรือผู้ช่วยพยาธิวิทยา (PA) เป็นสิ่งสำคัญที่ต้องทำความเข้าใจล่วงหน้าเพื่อวางแผนขนาดของเนื้อเยื่อที่เลือกสำหรับการวิเคราะห์ (ดูความหนาของตัวอย่าง) และเช่นเดียวกันคือ จริงสำหรับการเลือกคาสเซ็ตสำหรับเนื้อเยื่อที่จะแปรรูป คาสเซ็ตบางอันมีรูเล็กมากซึ่งทำให้ยากต่อการผ่านสื่อที่ฝังไว้เพื่อผ่านเพื่อสร้างบล็อคเนื้อเยื่อ บางประเภทมีรูที่ใหญ่มาก ส่งผลให้เนื้อเยื่อหรือชิ้นส่วนขนาดเล็กอาจสูญหายได้ในระหว่างการประมวลผลเนื้อเยื่อ

เนื้อเยื่อเล็กๆ อาจหายไปหากไม่ได้ฝังไว้ เนื่องจากความสามารถของห้องปฏิบัติการเนื้อเยื่อวิทยาในการมองเห็นเมื่อทำการฝัง นั่นคือเหตุผลว่าทำไมศูนย์ฝังตัวสมัยใหม่จึงมีจำหน่ายพร้อมแว่นขยายแบบถอดได้/แบบถอดไม่ได้ พื้นที่ทำงานที่มีแสงสว่างเพียงพอก็มีความสำคัญเช่นกัน และยังมีศูนย์ฝังและไฟ LED ให้เลือกอีกด้วย

สามารถรับทิชชู่ได้หลายวิธีและปรับต้นทุนให้เหมาะกับวิธีการเหล่านี้
เนื้อเยื่อสด:หากส่งเนื้อเยื่อใหม่ เนื้อเยื่อนั้นจะถูกใส่ลงในฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ที่เป็นกลาง 10% เพื่อการตรึงข้ามคืนก่อนนำไปแปรรูป
เนื้อเยื่อคงที่:เรารับทิชชู่ที่ติดด้วยสารยึดเกาะต่างๆ เมื่อการตรึงเสร็จสมบูรณ์ โปรดถ่ายโอนตัวอย่างไปยังเอทานอล 70%
เนื้อเยื่อคงที่ใน Cassette:ลูกค้าสามารถใส่ทิชชู่ลงในตลับเพื่อให้แน่ใจว่ามีการวางแนวที่ต้องการ

ต่อไปนี้มีไว้สำหรับลูกค้าของเราและพร้อมสำหรับการรับสินค้าใน E1515:
ฟอร์มาลินบัฟเฟอร์เป็นกลาง 10% (NBF)
เทป (มีค่าธรรมเนียม)
ห่อชิ้นเนื้อ / ตลับ

แก้ไขเนื้อเยื่อตามต้องการ:ปล่อยให้ประมาณ 1 มม./ชั่วโมง เพื่อให้สารยึดเกาะซึมเข้าไปในเนื้อเยื่อของคุณ และปริมาตรของตัวตรึงถึงเนื้อเยื่อ 10-20 เท่า
เทปฉลาก:เมื่อติดฉลากคาสเซ็ต ให้ใช้เฉพาะมาร์กเกอร์ต้านทานรีเอเจนต์ (เช่น ปากกา Statmark) หรือดินสอไส้แข็ง #2 สำหรับคาสเซ็ต ห้ามใช้ปากกาหรือมาร์กเกอร์ Sharpie ตัวทำละลายที่ใช้ในกระบวนการผลิตสามารถขจัดหมึกออกจากปากกามาร์กเกอร์ Sharpie "ถาวร" ได้
ตรวจสอบให้แน่ใจว่าชิ้นส่วนเล็กๆ จะไม่สูญหาย:เพื่อป้องกันไม่ให้เนื้อเยื่อขนาดเล็กสูญหายระหว่างการประมวลผล ให้ใส่ในตลับตรวจชิ้นเนื้อหรือห่อด้วยกระดาษกรอง เครื่องประมวลผลเนื้อเยื่อใช้สุญญากาศเพื่ออำนวยความสะดวกในการแทรกซึมซึ่งสามารถเอาเนื้อเยื่อออกจากคาสเซ็ตได้
วางในตลับตามทิศทางที่ต้องการ:เมื่อวางทิชชู่ลงในคาสเซ็ต พื้นผิวของทิชชู่ที่วางลงในคาสเซ็ตจะถูกวางลงเพื่อฝัง และนี่คือพื้นผิวที่ถูกแบ่งส่วนก่อน โปรดระบุคำขอฝังพิเศษใดๆ ในแบบฟอร์มการส่ง
วางตัวอย่างไว้ในภาชนะหลังคารั่วที่มีฝาปิดมิดชิด ตรวจสอบให้แน่ใจว่าทิชชู่และหรือตลับทั้งหมดแช่อยู่ในเอทานอล 70% อย่างสมบูรณ์ เพื่อให้ตัวอย่างไม่แห้ง
ติดฉลากภาชนะขนส่ง:โปรดระบุชื่อ PI ชื่อนักวิจัย (ผู้ส่ง) วิธีแก้ไข และวันที่
จัดเตรียมตัวอย่างและแบบฟอร์มการส่งให้กับ RHS มีเอกสารแยกต่างหากเพื่อระบุการระบุสิ่งส่งตรวจ

สามารถรับทิชชู่ได้หลายวิธีและปรับต้นทุนให้เหมาะกับวิธีการเหล่านี้
การแช่แข็งอย่างรวดเร็วแทนที่จะแช่แข็งอย่างช้าๆ จะช่วยลดการก่อตัวของผลึกน้ำแข็งในเนื้อเยื่อ
เนื้อเยื่อสด:หากส่งเนื้อเยื่อใหม่ ให้แช่แข็งอย่างรวดเร็วโดยไม่ต้องตรึง
เนื้อเยื่อคงที่:เรารับทิชชู่ที่ติดด้วยสารยึดเกาะต่างๆ ลูกค้าบางรายเลือกที่จะเตรียมตัวอย่างผ่านการไล่ระดับซูโครสก่อนที่จะแช่แข็ง เมื่อเตรียมเนื้อเยื่อแล้ว โปรดถ่ายโอนตัวอย่างไปยังซูโครส 30% ก่อนที่จะส่งไปยัง RHS
บล็อกแช่แข็งในแม่พิมพ์ OCT: ลูกค้าสามารถแช่แข็งตัวอย่างของตนเองได้เพื่อให้แน่ใจว่ามีการวางแนวที่ต้องการ จากนั้นสามารถจัดเตรียมบล็อกแช่แข็งให้กับ RHS เพื่อการแบ่งส่วน/ดำเนินการต่อไปได้

แม่พิมพ์ทิชชู่ที่ติดฉลากไว้ล่วงหน้าจะถูกเติมหนึ่งในสามของสารประกอบที่ฝัง OCT
ควรเช็ดเนื้อเยื่อเบาๆ ให้ปราศจากของเหลวภายนอกก่อนที่จะนำไปแช่แข็ง
ชิ้นงานเนื้อเยื่อจะวางอยู่ในแม่พิมพ์เนื้อเยื่อ (ควรรักษาระยะห่างระหว่างขอบของเนื้อเยื่อและด้านข้างของแม่พิมพ์)
ส่วนที่เหลือของแม่พิมพ์เนื้อเยื่อจะเต็มไปด้วยสื่อการฝัง OCT ตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวอย่างถูกล้อมรอบและครอบคลุมโดย OCT
แม่พิมพ์เนื้อเยื่อจะลอยอยู่ในอ่างไนโตรเจนเหลวจนแข็งตัวสนิท OCT จะแน่นและทึบ/ขาว
นำแม่พิมพ์ออกจากไนโตรเจนเหลวแล้วห่อด้วยกระดาษฟอยล์ให้แน่น
วางตัวอย่างที่ห่อด้วยฟอยล์ไว้ในถุงพลาสติกซึ่งมีฉลากระบุตัวอย่างและวันที่อย่างถูกต้อง โปรดระบุชื่อ PI ชื่อนักวิจัย (ผู้ส่ง) วิธีแก้ไข และวันที่
ควรเก็บเนื้อเยื่อไว้ที่ -80 C และส่งไปยัง RHS ด้วยน้ำแข็งแห้ง
จัดเตรียมตัวอย่างและแบบฟอร์มการส่งให้กับ RHS มีเอกสารแยกต่างหากเพื่อระบุการระบุสิ่งส่งตรวจ